細胞凍存和復蘇原則及程序

一、凍存和復蘇的原則：慢凍快融當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶；相反結晶就大，大結晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。二、標準程序當溫度在-25℃以上時，1～2℃/min當溫度達-25℃以下時，5～10℃/min，當溫度達-100℃時，可迅速放入液氮中三、簡易程序將凍存管（管口要朝上）放入紗布袋內，紗...

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ELISA操作之標本的采取和保存、保溫

一、標本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，HRP為標記的ELISA測定中，以溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均...

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單克隆抗體的應用　

單克隆抗體問世以來，由于其*的特征已迅速應用于醫學很多領域。主要表現在以下幾個方面。1．檢驗醫學診斷試劑作為檢驗醫學實驗室的診斷試劑，單克隆抗體以其特異性強、純度高、均一性好等優點，廣泛應用于酶聯免疫吸附試驗、放射免疫分析、免疫組化和流式細胞儀等技術。并且單克隆抗體的應用，很大程度上促進了商品化試劑盒的發展。目前，應用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應用于：①病原微生物抗原、抗體的檢測；②腫瘤抗原的檢測；③免疫細胞及其亞群的的檢測；④激素測定；⑤細胞因子的測定。單克隆抗體對抗...

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玻璃儀器清洗規程

1、試管、燒杯、漏斗等玻璃儀器如無特殊要求，用洗衣粉刷洗內壁，自來水沖凈后，純凈水潤洗三次，以內壁不掛水珠為準，自然晾干。有效期為七日，過期后使用時重新洗滌。2、液相色譜、氣相色譜使用的進樣瓶洗滌方法和原則與滴定管相同。3、效價用雙碟用完后，先浸入來蘇水中24h，取出超聲20分鐘，自來水逐個沖凈，純凈水潤洗后，以碟上不掛水珠為準自然晾干，裝入桶內。160℃干烤2小時滅菌備用。有效期為七日，過期后使用時重新160℃干烤2小時即可。4、微生物限度測定用三角瓶、刻度吸管、試管、雙碟...

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抗體的基因重排

抗體的L鏈是由C、V、J三個基因簇編碼的，H鏈由C、V、D、J四個基因簇編碼的。是編碼可變區，300個種類；編碼高變區,有15～20個種類；編碼連接V、V有DJC的結合區，4～5個種類；編碼恒定區，有C僅有一種。這些外顯子通過多種多樣的重排，所合成出的肽鏈，還要再進一步進行L和H鏈組合，這樣zui后生成的抗體種類就非常多了。抗體基因重排是發生在淋巴細胞分化的時候。按理化性質和生物學功能，可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。1、IgM抗體是免疫應答中首先分泌的...

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常用的幾種抗原修復方法

1、微波爐加熱在微波爐里加熱0.01枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）至沸騰后將組織芯片放入，斷電，間隔5-10分鐘，反復1-2次。2、高壓熱修復在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01m枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）.蓋上不銹鋼鍋蓋，但不能鎖定。將玻片置于金屬染色架上，緩慢加壓，使玻片在緩沖液中浸泡五分鐘，然后將蓋子鎖定，小閥門將會升起來。10分鐘后除去熱源，置入涼水中，當小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復。（骨及軟骨組織的標本選擇較溫和的微波加熱...

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血清的滅活與分裝

一、化凍將血清（FetalBovineSerum，Hyclone）從－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜；也可室溫（或浸于自來水中）化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時保存；二、滅活1、放入室溫的水浴鍋內開始加熱（同時放入一個內裝200ml自來水的血清瓶，插入一根溫度計，溫度監控以此為準）；2、當溫度計顯示56℃時，控制在此溫度30分鐘±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56℃，則：若仍未超過60℃，且時間很短（比如：不超過5分鐘），則仍可使用；若超過6...

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ES細胞的凍存操作

1、常規方法將細胞消化成單細胞懸液；2、轉入試管，1000轉/分鐘離心5分鐘；3、配適量凍存液（為含10%二甲亞砜（DMSO），10%FBS的DMEM培養液）；4、棄上清，每管加入1ml凍存液，吹打成細胞懸液（只要使ES細胞分散成3—5個細胞的小團塊即可），轉入凍存管，作好標簽；5.放入程序凍存盒內24小時后轉入液氮罐中凍存。相關產品信息：凍存管,凍存盒,管鼓蓋,加樣槽,PCR板,PCR管架,Sigma現貨,Abcam抗體,GE試劑,Amresco試劑

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