人水通道蛋白2試劑盒
人水通道蛋白2試劑盒(Human Aquaporin 2, AQP-2 Kit)是一款專門用于體外定量檢測人來源生物樣本中水通道蛋白2(AQP-2)含量的專用實驗試劑組合,核心應用于基礎科研、臨床前研究領域,尤其適配人體腎臟水重吸收、體液平衡調控、腎臟上皮細胞功能及相關疾病(腎臟疾病、尿崩癥、水腫、電解質紊亂)研究。水通道蛋白2(Aquaporin 2, AQP-2)是水通道蛋白家族的關鍵成員,屬于經典水通道蛋白,主要表達于人腎臟遠曲小管和集合管上皮細胞,廣泛存在于人腎臟組織、尿液、血清及相關細胞樣本中,核心功能是介導水分子跨腎小管上皮細胞轉運,調控腎臟對水的重吸收過程,維持機體體液平衡、滲透壓穩定及尿量調節,其表達及含量異常與人體腎臟水重吸收障礙、尿崩癥、腎功能損傷、水腫及電解質紊亂密切相關,是相關疾病機制研究、腎臟水代謝功能評估及靶向藥物篩選的核心檢測指標。本試劑盒基于酶聯免疫吸附(ELISA)原理設計,集成了檢測所需全部試劑,具備特異性強、靈敏度高、操作便捷、結果穩定、物種針對性強等優勢,可快速、精準完成人各類樣本中水通道蛋白2的定量檢測,為人腎臟水代謝、體液平衡調控相關科研實驗提供標準化、可靠的數據支撐,適配不同科研場景的檢測需求。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法ELISA原理,專門針對人水通道蛋白2優化反應體系,有效規避人體內其他水通道蛋白家族成員(如AQP-1、AQP-3)、腎臟上皮細胞相關蛋白及雜蛋白的交叉干擾,確保檢測精準度與適用性,契合腎臟水轉運相關蛋白檢測的核心需求:
酶標板預先包被人水通道蛋白2特異性捕獲抗體,實驗時依次加入人樣本、標準品及HRP標記的人水通道蛋白2檢測抗體,經37℃恒溫溫育后,抗體與樣本/標準品中的AQP-2特異性結合,形成“捕獲抗體-AQP-2-檢測抗體"復合物;經徹di洗滌去除未結合的多余試劑(如未結合的檢測抗體、雜蛋白、組織基質雜質)后,加入TMB底物液,TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,加入終止液(硫酸溶液)后變為黃色,顏色深淺與樣本中人水通道蛋白2的含量呈正相關,通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),結合標準曲線即可計算出樣本中人水通道蛋白2的具體含量。該原理適配低濃度水通道蛋白檢測,可有效避免組織基質雜質、其他水通道蛋白的非特異性結合,保障檢測結果的準確性,尤其適配人腎臟組織勻漿、尿液樣本、腎小管上皮細胞培養液等低濃度AQP-2樣本的精準檢測。
產品特點
1. 物種特異性強,無交叉干擾:采用人水通道蛋白2專屬特異性單克隆抗體,可特異性識別人來源樣本中的AQP-2,有效規避小鼠、大鼠等其他物種同源水通道蛋白及人體內AQP-1、AQP-3等其他水通道蛋白家族成員、腎臟上皮細胞相關蛋白的干擾,同時避免樣本中雜蛋白、組織基質雜質的非特異性結合,確保檢測結果的準確性,批內變異系數CV<5%,板間變異系數CV<8%,交叉反應率<5%,保障實驗數據重復性。
2. 靈敏度高,檢測范圍廣:ELISA法檢測范圍通常為1-100ng/mL,靈敏度可達0.5ng/mL,可精準檢測人低濃度樣本(如人血清、血漿、腎臟組織勻漿、尿液、腎小管上皮細胞培養液)中的水通道蛋白2,滿足不同科研樣本的檢測需求,標準曲線相關系數R2≥0.99,線性表現優異,適配人體生理及病理狀態下的含量變化檢測,可精準區分正常、腎臟水代謝異常狀態下的AQP-2水平差異。
3. 操作便捷,效率高效:試劑盒包含檢測所需全部試劑(預包被酶標板、凍干標準品、HRP標記的檢測抗體、濃縮洗滌液、TMB底物液、終止液、封板膜等),無需額外配制核心試劑,實驗流程簡化,全程可在1-2小時內完成,適配96孔板高通量設計,單次可檢測96個樣本,大幅提升實驗效率,新手也可輕松操作。
4. 穩定性好,保質期長:試劑經嚴格質檢與工藝優化,凍干標準品、特異性抗體及底物活性穩定,未開封試劑盒按要求儲存可穩定保存12個月以上,稀釋后的試劑可短期冷藏使用,避免反復凍融導致的活性下降,確保不同批次實驗結果的一致性,保障實驗重復性;標準品采用專用蛋白保護緩沖液配制,密封性好,可有效防止降解,進一步提升試劑穩定性。
5. 適配性廣,場景多元:專門適配人來源樣本檢測,兼容人血清、血漿(EDTA或肝素抗凝)、組織勻漿(腎臟、膀胱、肺組織等)、細胞培養液(腎小管上皮細胞、腎臟集合管細胞等)、細胞裂解液、尿液等多種樣本類型,廣泛應用于人腎臟水重吸收、體液平衡調控、腎臟疾病、尿崩癥、水腫、電解質紊亂等相關科研領域,適配基礎科研、靶向藥物篩選、腎臟水代謝功能評估等實驗場景。
6. 安全便捷,風險可控:優化試劑配方,無需氯仿、二氯甲烷等有毒有機溶劑,操作過程更安全,同時配套詳細說明書,明確操作步驟、樣本處理及注意事項,降低實驗失誤概率,保障實驗安全與順利進行;試劑組分均經過無菌檢測,可有效避免污染風險,適配常規科研實驗室操作。
適用樣本類型
本試劑盒專門適配人來源樣本,可滿足人腎臟水代謝、體液平衡調控相關科研實驗的多樣化檢測需求,具體適用樣本包括:人血清、血漿(EDTA或肝素抗凝)、組織勻漿(腎臟、膀胱、肺組織等)、細胞培養液(腎小管上皮細胞、腎臟集合管細胞等)、細胞裂解液、尿液。其中,組織勻漿需用預冷PBS(含蛋白酶抑制劑更佳)制備,低溫冰浴操作,防止AQP-2降解;血清/血漿樣本采集后需低溫離心處理,避免溶血,新鮮樣本優先檢測,若無法立即檢測需分裝冷凍保存,避免反復凍融;尿液樣本需新鮮采集,低溫離心去除雜質,避免微生物污染導致AQP-2降解;細胞裂解液需避免劇烈震蕩,防止蛋白變性,確保檢測準確性;組織樣本采集后及時處理,避免雜質干擾,保障AQP-2活性。(具體樣本處理方法請參考產品說明書)
儲存與注意事項
(一)儲存條件
1. 未開封試劑盒:需置于2-8℃避光密封保存,避免陽光直射、溫度波動及潮濕環境,嚴禁冷凍,未開封試劑盒有效期通常為12個月,具體以說明書標注為準。
2. 組分儲存:凍干標準品、人水通道蛋白2特異性抗體、TMB底物液等核心組分需置于-20℃避光保存,避免反復凍融(≤3次),防止活性喪失;濃縮洗滌液可在2-8℃冷藏保存;標準品及抗體母液稀釋后需存放于4℃,切勿放-20℃低溫處,以免降低效價,稀釋后的抗體避免存放超過1天;建議在樣本處理時添加少量蛋白酶抑制劑,防止AQP-2降解。
3. 稀釋后試劑:稀釋后的洗滌液可在4℃冷藏保存,1周內用完;稀釋后的標準品、HRP標記檢測抗體需現配現用,未用完的可短期冷藏,避免反復凍融及光照;試劑配制需注意保質期,夏季即使冷藏也需避免批量配制過多,防止變質。
4. 運輸條件:運輸時采用凝膠冷藏包,確保試劑溫度穩定在2-8℃,避免劇烈震蕩、暴曬及ji端溫度,防止試劑失效,尤其注意保護抗體及底物,避免光照直射和溫度驟變。
(二)注意事項
1. 實驗全程需嚴格遵循無菌操作規范,實驗器具需提前高壓滅菌處理,加樣時使用無菌槍頭,避免試劑及樣本污染,尤其是組織勻漿、尿液和血漿樣本,污染會導致檢測結果偏高;實驗臺面需保持清潔,避免試劑交叉污染,減少基質效應對檢測結果的影響。
2. 試劑使用前需從冰箱取出,置于室溫(25℃左右)平衡30分鐘以上,避免溫差導致冷凝水干擾實驗;試劑配制及加樣時動作輕柔,避免劇烈震蕩,防止試劑失效或抗原抗體變性,同時避免AQP-2降解,抗體與樣本孵育時避免劇烈晃動,確保抗原抗體充分結合;實驗用蒸餾水或去離子水需新鮮、高質量,自配緩沖液需檢測pH值。
3. 孵育及顯色過程需嚴格控制溫度和時間,尤其是顯色反應需避光進行,避免光照影響顯色效果;終止反應后需在10分鐘內完成讀數,防止顏色消退,確保檢測數據穩定,同時避免過度孵育導致非特異性顯色。
4. 不同批次的試劑不可混用,試劑盒配套試劑需單獨使用,避免與其他試劑盒試劑交叉使用,防止干擾實驗結果;實驗結束后,廢棄試劑及耗材需按生物安全規范妥善處理,避免污染環境;含終止液的廢液需單獨收集處理,避免腐蝕設備。
5. 操作含硫酸的終止液時,需佩戴手套、口罩、護目鏡,避免皮膚接觸及吸入,防止刺激傷害;實驗臺面需保持清潔,避免試劑灑落,若不慎接觸皮膚,需立即用大量清水沖洗;試劑瓶蓋需及時蓋緊,防止揮發和污染。
6. 若樣本中人水通道蛋白2含量超出檢測范圍,需適當稀釋后重新檢測,不可直接檢測,以免導致結果偏差;檢測過程中可設置陽性對照、陰性對照和空白對照,確保實驗體系正常,陽性對照孔吸光度需落在標準曲線范圍內,否則提示實驗失效;樣本需新鮮采集處理,全程低溫操作并添加蛋白酶抑制劑,避免長時間放置或反復凍融導致AQP-2降解,影響檢測結果;樣本中不可含NaN3,以免抑制HRP活性導致假陰性;避免樣本中組織基質雜質或尿液雜質過多,可提前離心純化處理。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產品說明書為準。