飼養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)

一、主要實驗材料

1、培養(yǎng)液為F-DMEM。

2、小鼠周齡為7～8w的性成熟母小鼠和周齡為8w的種公鼠。

二、小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）的培養(yǎng)

1、小鼠胚胎的準(zhǔn)備

①性成熟母小鼠與種公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合籠。

②每天早上觀察母小鼠陰道口。有乳白色或蛋黃色凍膠狀物（陰道栓）即確定為懷孕。

④見栓當(dāng)天上午定為懷孕的0.5d。

③取懷孕12.5～14.5d母鼠,斷頸處死，無菌條件下暴露子宮。餿用鑷子提起近子宮頸端,分離子宮系膜,剪斷子宮角。

⑤取出整個子宮,在無菌濾紙上吸干血跡,置于有PBS或無血清DMEM平皿內(nèi)。用PBS洗滌三次,棄除表面殘余血跡。

⑥沿子宮系膜側(cè)剪開子宮,取出帶有胎膜的胚胎,置于另一盛有PBS或無血清DMEM平皿內(nèi),充分洗滌,棄除表面紅細胞。

⑦用小鑷子撕破胎膜,取出胎鼠,棄除胎膜,用PBS洗滌三次。

⑧去除胚胎頭部、內(nèi)臟和四肢，將軀干部置于另一盛有PBS或無血清DMEM平皿內(nèi),用PBS至少洗滌三次,充分棄除紅細胞。

2、小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）的培養(yǎng)


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